pcr试剂,药厂的pcr试剂是什么意思是什么产品吗

2025-06-23 13:52:49 阅读 :

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快检试剂盒的原理是什么

我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低,高的容易检测,低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍,达到可以检测出来的浓度。基本操作如下:

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收集咽拭子等病毒样本,通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子,萃取病毒RNA。一方面是萃取,另一反面,打碎之后就没有了感染性,相对安全一些。

02

由于这次新冠肺炎是单链RNA病毒,所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式,同一个视频不同格式,意思都一样,可以互相转换。

03

常规PCR反应,加热到94℃把DNA拉链拉开,之后再55℃-60℃让引物,就是拉链扣分别套在两条拉链上,再升温到72℃让拉链自己复制,用左拉链做模板造一个右拉链,用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环,RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。

药厂的pcr试剂是什么意思是什么产品吗

PCR是一种DNA体外快速扩增的技术,PCR试剂就是进行PCR实验用的试剂。

qpcr买试剂盒还要设计引物吗

qpcr和普通的PCR是一样的,需要buffer,dNTP,taq酶,引物,模板,水等qpcr试剂盒是将buffer,dNTP,taq酶混在一起,还需要引物和模板。如需设计引物,可以添加为青生物公众号,由专业人员提供免费的荧光定量PCR引物设计服务。

pcr反应体系配制详细操作过程

1.试剂准备阶段

试剂准备是PCR操作的第一个流程,需要在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行,用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。所有的PCR体系都应该在-20℃保存,除了ddH2O之外,其余的试剂组份需完全融化之后再加入,以免影响浓度。配制反应体系应在快速进行,以减少非特异性扩增。体系配制完成之后应马上进行PCR反应。

2.样本制备阶段

样本制备是整个PCR反应中最为关键的环节,在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。严格遵守操作规程进行加样操作,操作时候尽量少说话或者不说话。

所有操作需要在生物安全柜内进行,操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒,注意生物安全柜中物品的排放。戴手套并勤于更换,要有「无核酸观念」。

3.核酸扩增

在核酸扩增环节需要选择质量好的Ep管,装入反应体系的EP管上机前混匀、离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部。在样本检测的同时设立对照(阳性对照、阴性对照、阴性模板、试剂对照)。同时严密检测PCR扩增仪的各项性能指标,其中对PCR扩增仪而言温度控制就意味着质量。

4.产物分析

常见问题:

1)无CT值出现:模板量不足(杂质的引入及反复冻融的情况等)

2)CT值出现过晚(大于38):各种反应成分的降解或加样量的不足

3)标准曲线线性相关性不佳:加样误差、标准品出现降解等

4)阴性对照有信号:模板有基因组的污染

5)扩增效率低:反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解、反应抑制

6)扩增曲线的异常:模板的浓度太高或荧光染料的降解

四、实验室操作环境的维护

1)各工作区要有一定的隔离,进入工作区域应按照单一的方向进行。试剂贮存和准备区→标本制备区→PCR扩增区→产物分析区单一方向进行。

2)各个区域实验用品专用:各个区域实验设备和物品应有明确的标记,不能混用。

3)实验场所要保持通风良好,严格监测各个工作区的温湿度。

4)注意实验室污染的预防。

整个PCR实验的操作都需要特别注意避免污染,来自样本的、试剂的以及实验室各种气溶胶,要始终保持「无核酸观念」。

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